摘要：本實(shí)驗(yàn)利用柱層析法提取和分離了胡蘿卜素，并進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)改進(jìn)，取得了良好 的實(shí)驗(yàn)效果。

　　關(guān)鍵字：無(wú)水Na2SO4 研磨 預(yù)處理

　　一、貴重儀器

　　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 一臺(tái)

　　UV-240型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 一臺(tái)

　　電熱干燥箱 一臺(tái)

　　二、常規(guī)儀器

　　層析柱(20x700mm) 一根

　　鐵架臺(tái) 一套

　　錐形瓶 　500ml 二個(gè)

　　50ml 五個(gè)

　　燒杯 　500ml 二個(gè)

　　滴液漏斗 　　500ml 一個(gè)

　　量筒　 500ml、50ml 各一個(gè)

　　玻璃棒 100cm 一個(gè)

　　20cm 二個(gè)

　　研缽 一套

　　滴管 二個(gè)

　　三、試劑

　　80-100目 柱層析硅膠 青島海洋化工廠分廠

　　60-90℃ 石油醚 北京化工廠 AR

　　乙醇 北京化工廠 AR

　　乙酸乙脂 北京化工三廠 AR

　　無(wú)水Na2SO4 天津市塘沽鄧中化工廠 CP

　　1% AgNO3水溶液(自制)

　　pH試紙

　　胡蘿卜(自備)

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1、提取

　　2、柱層析

　　3、結(jié)構(gòu)表征-胡蘿卜素的UV分析

　　具體實(shí)驗(yàn)步驟見(jiàn)講義2-3頁(yè)有關(guān)內(nèi)容。

　　五、實(shí)驗(yàn)記錄及討論

　　1、本實(shí)驗(yàn)在提取操作中進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)性嘗試，在研磨過(guò)程中加入了3g的無(wú)水Na2SO4以增強(qiáng)研磨強(qiáng)度，有利于有效成分的提取。在選用提取液時(shí)未使用乙醇，而使用了15ml乙醚，10ml丙酮X2次，10ml石油醚X5次，采用在研缽中加提取劑，研磨，然后傾其上層液體抽濾。這樣避免了將混合物全部倒入漏斗，造成抽濾難以進(jìn)行的后果。

　　2、本實(shí)驗(yàn)中耗時(shí)最多的一步操作是硅膠的處理過(guò)程：

　　第一、硅膠的預(yù)處理，我們以濃鹽酸浸泡硅膠14小時(shí)，然后用蒸餾水洗滌硅膠4次后，將起進(jìn)行減壓抽濾，后不斷加蒸餾水沖洗。在1小時(shí)之后，抽濾的水呈中性，但仍然含有氯離子。經(jīng)過(guò)4小時(shí)不斷的沖洗才使得抽濾液中基本不含氯離子。晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小時(shí)。

　　第二、活化后的硅膠加石油醚浸泡并攪拌均勻。在裝柱時(shí)，宜使用口徑較大的玻璃漏斗置于 層析柱上部，注入1/2高的石油醚，打開(kāi)下部活塞，然后盡量均勻地將硅膠傾入漏斗，這樣可以防止層析柱中形成斷層(這一步是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟)。

　　3、柱層析過(guò)程中得到了二個(gè)顯色帶，第一個(gè)帶顯橙黃色，第二個(gè)帶顯淡黃色。從加入洗脫劑到收集完第一個(gè)顯色帶耗時(shí)90分鐘，使用洗脫劑(石油醚/乙酸乙脂=2/1V/V)120ml，收集到約50ml。然后加入95%的乙醇進(jìn)行洗脫，耗時(shí)30分鐘收集到了第二個(gè)顯色帶，約有30ml。由實(shí)驗(yàn)可知以極性大的洗脫劑洗脫速度較快，而且收集的顯色帶較集中。如果在層析柱中有氣泡或斷層將影響分離效果，造成顯色帶較寬。

　　六、譜圖分析

　　1、實(shí)驗(yàn)所得第一個(gè)顯色帶為α—胡蘿卜素

　　參考數(shù)據(jù)為：α—胡蘿卜素 473(134896)，444(147911)，422(104713)

　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為： 473.20(119490)，445.47(137330)，425.84(110090)

　　2、實(shí)驗(yàn)所得第二個(gè)顯色帶呈淡黃色，做旋光分析發(fā)現(xiàn)起具有較小的旋光度，可能是β-胡蘿卜素。